Protocolo para la determinación de celulosa mediante el utilizando el
reactivo de Schweitzer.
Se fundamenta en la disolución de la celulosa utilizando el reactivo de
Schweitzer. Este reactivo forma un complejo con la celulosa que precipita al
acidificar o tratarse con alcohol, permitiendo su determinación gravimétrica.
Preparación del reactivo de Schweitzer
1) Pesar 5,5 g de hidróxido cúprico.
2) Transferir a un vaso de precipitados de 2 L
3) Agregar 1 L de solución de amoniaco 28-29%.
4) Agitar la mezcla por 30 min hasta la formación de un color azul intenso.
Realizar este paso en baño de agua-hielo.
Disolución de la celulosa
1) Cortar un saquito de mate por los laterales, retirar completamente la yerba y
limpiar cualquier residuo adherido.
2) Pesar el saquito vacío. Registrar este valor como m1.
3) Colocar el saquito en un frasco color caramelo y agregar 35 mL del reactivo
de Schweitzer.
4) Agitar la mezcla en un agitador orbital a 150 rpm por 90-120 min.
Posteriormente, dejar reposar el frasco durante 24 horas para asegurar la
completa solubilización de la muestra.
5) Transferir el contenido a un tubo Falcon y centrifugar. Descartar el
sobrenadante (donde se encuentra la celulosa disuelta) y recuperar el residuo
sólido insoluble.
6) Agregar al residuo 10 mL de HCl 1,25 % v/v. Agitar manualmente con una
varilla de vidrio hasta que el sólido pierda el color azul intenso característico
del reactivo de Schweitzer.
7) Repetir el paso anterior pero esta vez mediante agitación mecánica en un
agitador orbital durante 10 min.
8) Lavar el sólido remanente dos veces con agua destilada, seguido de un
lavado final con alcohol etílico al 80% m/m para facilitar el secado.
9) Secar el residuo sólido en estufa a 50-60°C durante 20 min (o hasta peso
constante).10) Pesar el residuo seco y registrar la masa como m2 (material no celulósico).
11) El contenido de celulosa se calcula según:
%Celulosa=masa inicial del saquito (m1)-masa del residuo seco(m2) / masa
inicial del saquito (m1)
Blanco de Control Ambiental: en una placa de Petri, colocar una fina capa de
glicerina, dejar sobre la mesada del Laboratorio 2005 durante todo el curso del
experimento.
Cortar los saquitos de mate (ensayo preliminar: Marca Unión) con cutter.
Abrirlos y retirar completamente las hojas de yerba mate.
Lavar cada saquito con agua destilada filtrada (acetato/nitrato de celulosa
0,45µ; Portafiltros Merck Millipore) a temperatura ambiente por quintuplicado.
Colocar cada saquito en un erlenmeyer que contenga 200 mL de agua filtrada y
previamente calentada a ebullición suave controlada. Simular manualmente la
preparación del mate. Dejar durante 5 minutos. Reservar los extractos
resultantes.
Digestión con H2O2: Agregar 20 mL de H2O2 30%V/V a los extractos
obtenidos en 1.4. Dejar en agitación orbital a 300 rpm por 24 horas.
Se filtran los extractos sobre una membrana (nitrato de celulosa 0,45µm, con
grilla cada 3000µ, Sartorius) colocada sobre un embudo de porcelana. Se filtra
al vacío. Se guardan los filtros en placas de Petri para su posterior análisis. Se
fotografía el filtro y se cuenta con microscopio (Arcano; XSZ-107BN) la
cantidad de MPs presentes por cuadrante. Sobre la foto obtenida se determina
utilizando el programa Image J las dimensiones del eje mayor de los MPs,
previa calibración de la escala empleando la grilla como referencia. Se estima
su valor promedio.
En paralelo se realiza otro tratamiento de muestra con tres saquitos en un
volumen de agua de 200 mL a ebullición, se hace la digestión con H2O2, se
filtra y se transfieren los MPs desde el filtro al ATR-FTIR para la
determinación de la composición polimérica.
Berenstein, G., Córdoba, P., Díaz, Y. B., González, N., Ponce, M. B., & Montserrat, J. M. (2024). 6
Macro, meso, micro and nanoplastics in horticultural soils in Argentina: Abundance, size distribution and
fragmentation mechanism. Science of the Total Environment, 906, 167672.
